Dithiothreitol (DTT) waa walax yar oo si caadi ah loo isticmaalo, oo sidoo kale loo yaqaan ku darista cagaaran ee cusub. Waa isku-dhis yar oo molecular organic ah oo leh laba kooxood oo mercaptan ah (-SH). Sababtoo ah sifooyinka iyo xasilloonida yaraynta, DTT si weyn ayaa loogu isticmaalaa tijaabooyinka bayoolojiga iyo bayoolojiga molecular.
Doorka ugu weyn ee DTT waa in la yareeyo isku xidhka disulfide ee borotiinnada iyo molecules-ka kale ee noolaha. Isku xidhka disulfide waa qayb muhiim ah oo ka mid ah laablaabashada borotiinka iyo xasilloonida, laakiin xaaladaha tijaabada qaarkood, sida falanqaynta SDS-PAGE ee la dhimi karo, isku-darka borotiinka iyo laablaabashada, waxaa lagama maarmaan ah in la yareeyo isku xidhka disulfide ee laba kooxood oo thiol ah si loo kala furfuro qaab-dhismeedka booska ee borotiinka. DTT waxay la falgeli kartaa isku xidhka disulfide si loo yareeyo kooxaha mercaptan, sidaas darteed waxay furaysaa qaab-dhismeedka booska ee borotiinka waxayna ka dhigaysaa mid fudud in la falanqeeyo oo la maareeyo.
DTT waxaa sidoo kale loo isticmaali karaa in lagu ilaaliyo dhaqdhaqaaqa ensaymka iyo xasilloonida. Falgallada qaar ee ensaymka lagu kiciyay, dhaqdhaqaaqa ensaymka waxaa yareyn kara oksaydhka. DTT waxay la falgeli kartaa oksaydhiyeyaasha si ay u yareeyaan walxaha aan waxyeelada lahayn, taasoo ilaalinaysa dhaqdhaqaaqa iyo xasilloonida ensaymka.
Marka la barbardhigo wakiilada wax-yaraynta dhaqameed sida β-mercaptoethanol (β-ME), DTT waxaa loo arkaa inay tahay wakiil wax-yareeya oo ammaan ah oo deggan. Ma aha oo kaliya mid deggan oo ku jira xalka biyaha, laakiin sidoo kale waxay ilaalisaa sifooyinkeeda wax-yaraynta heerkulka sare iyo xaaladaha aashitada.
Isticmaalka DTT waa mid fudud. Guud ahaan, DTT waxaa lagu milmaa kayd ku habboon ka dibna lagu daraa nidaamka tijaabada. Isugeynta ugu fiican ee DTT waa in la go'aamiyaa iyadoo loo eegayo tijaabada gaarka ah, waxaana guud ahaan loo isticmaalaa inta u dhaxaysa 0.1-1mM. Isugeynta hoose waxay yareyn kartaa saameynta xun ee koritaanka unugyada waxayna yareyn kartaa sunta unugyada sababtoo ah muujinta xad dhaafka ah ee borotiinnada bartilmaameedka ah. Isugeynta sare waxay sababi kartaa culays xad dhaaf ah oo dheef-shiid kiimikaadka unugyada ah, taasoo saameynaysa koritaanka unugyada iyo hufnaanta muujinta.
Habka lagu go'aamin karo heerka ugu wanaagsan ee isku-darka waa in la qiimeeyo heerka muujinta borotiinka bartilmaameedka ah iyadoo la sameynayo tijaabooyinka soo-saarista IPTG ee heerar kala duwan. Tijaabooyinka dhaqanka ee heerka yar waxaa lagu sameyn karaa iyadoo la adeegsanayo tiro badan oo ah isku-darka IPTG (tusaale ahaan 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, iwm.) saameynta muujinta ee heerarka kala duwanna waxaa lagu qiimeyn karaa iyadoo la ogaanayo heerka muujinta ee borotiinka bartilmaameedka ah (tusaale ahaan Western blot ama ogaanshaha fluorescence). Sida laga soo xigtay natiijooyinka tijaabada, isku-darka leh saameynta muujinta ugu fiican ayaa loo xushay isu-darka ugu fiican.
Intaa waxaa dheer, waxaad sidoo kale tixraaci kartaa suugaanta khuseeya ama waayo-aragnimada shaybaarrada kale si aad u fahamto heerka uruurinta IPTG ee caadiga ah ee la isticmaalo xaaladaha tijaabada ee la midka ah, ka dibna hagaaji oo u hagaaji sida waafaqsan baahiyaha tijaabada.
Waa muhiim in la ogaado in isku-darka ugu fiican uu kala duwanaan karo iyadoo ku xiran nidaamyada muujinta kala duwan, borotiinnada bartilmaameedka ah, iyo xaaladaha tijaabada ah, sidaa darteed waxaa ugu wanaagsan in kiis-kiis la hagaajiyo.
Marka la soo koobo, DTT waa walax yareysa oo si caadi ah loo isticmaalo oo loo isticmaali karo in lagu yareeyo isku xirnaanta disulfide ee borotiinnada iyo molecules-ka kale iyo in la ilaaliyo dhaqdhaqaaqa ensaymka iyo xasilloonida. Waxaa si weyn loogu isticmaalay tijaabooyinka bayoolajiga iyo bayoolajiga molecular.
Waqtiga boostada: Sebteembar-28-2023