Dithiothreitol (DTT) waa walax caadi ahaan loo isticmaalo dhimista, sidoo kale loo yaqaan wax lagu daro cagaarka cusub.Waa unug yar oo unugyo noole ah oo leh laba kooxood oo mercaptan (-SH).Sababo la xiriira dhimista guryaha iyo xasilloonida, DTT waxaa si weyn loogu isticmaalaa tijaabinta bayoloji iyo molecular.
Doorka ugu weyn ee DTT waa in la yareeyo curaarta disulfide ee borotiinnada iyo biomolecules kale.Isku-xidhka disulfide-ku waa qayb muhiim ah oo ka mid ah isku-laabashada borotiinka iyo xasilloonida, laakiin xaaladaha tijaabada ah ee qaarkood, sida falanqaynta SDS-PAGE oo la dhimi karo, dib-u-habaynta borotiinka iyo laalaabinta, waxaa lagama maarmaan ah in la yareeyo curaarta disulfide ee laba kooxood oo thiol ah si loo furfuro qaab-dhismeedka bannaan ee borotiinka.DTT waxay la falgali kartaa curaarta disulfide si ay u yarayso kooxaha mercaptan, sidaas awgeed waxay fureysaa qaab dhismeedka boosaska borotiinka oo u sahlaysa in la falanqeeyo oo la maareeyo.
DTT sidoo kale waxaa loo isticmaali karaa si loo ilaaliyo dhaqdhaqaaqa enzyme iyo xasiloonida.Qaar ka mid ah falcelinta enzyme-catalyzed, waxqabadka enzyme waxaa laga yaabaa in la yareeyo oksidatu.DTT waxay la falgali kartaa oksaydhiyeyaasha si ay u yarayso walxaha aan waxyeellada lahayn, si ay u ilaaliso dhaqdhaqaaqa iyo xasilloonida enzyme.
Marka la barbar dhigo wakiilada dhimista dhaqameed sida β-mercaptoethanol (β-ME), DTT waxaa loo arkaa inay tahay wakiil yaraynta badbaado badan oo xasilloon.Ma aha oo kaliya mid xasilloon oo ku jirta xalalka aqueous, laakiin sidoo kale waxay ilaalisaa sifooyinka dhimista ee heerkulka sare iyo xaaladaha saldhig-acid.
Isticmaalka DTT waa mid fudud.Guud ahaan, DTT waxaa lagu milmaa meel ku haboon ka dibna lagu daro nidaamka tijaabada.Xoojinta ugu fiican ee DTT waxay u baahan tahay in la go'aamiyo iyadoo loo eegayo tijaabada gaarka ah, waxaana guud ahaan loo isticmaalaa inta u dhaxaysa 0.1-1mM.Xoojinta hoose waxay yareyn kartaa saameynta xun ee koritaanka unugyada waxayna yareyn kartaa cytotoxicity sababtoo ah xad dhaafka borotiinnada bartilmaameedka ah.Isku-duubnaanta sare waxay keeni kartaa culeyska dheef-shiid kiimikaadka unugyada xad-dhaafka ah, saameynaya korriinka unugyada iyo waxtarka muujinta.
Habka lagu go'aamiyo diiradda ugu fiican waxay noqon kartaa in la qiimeeyo heerka muujinta borotiinka la beegsanayo iyada oo la samaynayo imtixaannada soo-saarka IPTG ee uruurinta kala duwan.Tijaabooyin dhaqameed yar-yar ayaa lagu samayn karaa iyadoo la adeegsanayo tiro badan oo IPTG ah (tusaale 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, iwm.) bararka ama ogaanshaha fluorescence).Marka loo eego natiijooyinka tijaabada ah, xoojinta saamaynta ugu wanaagsan ee muujinta ayaa loo doortay sida ugu fiican.
Intaa waxaa dheer, waxaad sidoo kale tixraaci kartaa suugaanta ku habboon ama waaya-aragnimada shaybaarrada kale si aad u fahamto qiyaasta fiirsashada IPTG ee inta badan la isticmaalo iyadoo lagu jiro xaalado tijaabo ah oo la mid ah, ka dibna wanaaji oo la hagaajiyo iyadoo loo eegayo baahiyaha tijaabada.
Waxaa muhiim ah in la ogaado in feejignaanta ugu fiican ay kala duwanaan karto iyadoo ku xiran hababka kala duwan ee muujinta, borotiinka bartilmaameedka, iyo xaaladaha tijaabada ah, sidaas darteed waxaa fiican in la hagaajiyo xaalad kasta.
Marka la soo koobo, DTT waa wakiilka yaraynta caadi ahaan loo isticmaalo si loo yareeyo curaarta disulfide ee borotiinada iyo biomolecules kale iyo si loo ilaaliyo dhaqdhaqaaqa enzyme iyo xasiloonida.Waxa si weyn loogu isticmaalay shaybaarada bayoolaji iyo molecular.
Waqtiga boostada: Seb-28-2023